EMSA中紫外交聯(lián)時(shí)間怎么確定？將尼龍膜置于濾紙上干燥片刻，在紫外交聯(lián)儀中將轉(zhuǎn)有DNA的一面向上用120mJ/cm2能量輻照交聯(lián)，紫外交聯(lián)儀的紫外傳感器會(huì)根據(jù)當(dāng)前紫外交聯(lián)儀的紫外線(xiàn)強(qiáng)度自動(dòng)計(jì)算輻照時(shí)間，當(dāng)輻照能量達(dá)到設(shè)定值時(shí)候，會(huì)自動(dòng)停止輻照。

紫外照射的目的在于使DNA 中的一小部分T 與膜表面帶正電的氨基基團(tuán)之間形成交聯(lián)(Church and Gilbert 1984)。紫外照射不能過(guò)度,否則將造成堿基T之間發(fā)生共價(jià)結(jié)合而降低雜交信號(hào)。交聯(lián)時(shí)將膜上帶有DNA的一面朝向紫外光源。 

EMSA紫外交聯(lián)時(shí)間設(shè)置方法：

紫外交聯(lián)儀設(shè)置時(shí)間的步驟：按壓智能紫外交聯(lián)儀UCL-3500操作面板上program按鍵，選擇時(shí)間模式，通過(guò)數(shù)字按鍵，輸入需要照射的時(shí)間，然后按壓enter按鍵，這樣需要的交聯(lián)時(shí)間就成功設(shè)置好了，按star按鍵，紫外交聯(lián)儀開(kāi)始輻照，屏幕顯示倒計(jì)時(shí)時(shí)間，交聯(lián)時(shí)間結(jié)束后，交聯(lián)儀紫外燈自動(dòng)停止運(yùn)行。

EMSA紫外交聯(lián)能量

智能紫外交聯(lián)儀UCL-3500可用于Northern、EMSA blotting、EMSA等膜交聯(lián),當(dāng)使用254 nm波長(zhǎng)、能量為120.0mJ/cm2交聯(lián)時(shí),尼龍模的氨基和DNA的胸腺嘧啶(或RNA的尿嘧啶)之間形成共價(jià)鍵穩(wěn)定。

EMSA紫外交聯(lián)能量設(shè)置方法：

按壓智能紫外交聯(lián)儀操作面板上program按鍵，選擇能量模式(energy)，通過(guò)數(shù)字按鍵，輸入需要照射的能量（0.120J/cm2），然后按壓enter按鍵，這樣需要的交聯(lián)能量就成功設(shè)置好了，按star按鍵，紫外交聯(lián)儀開(kāi)始輻照，屏幕顯示剩余能量，交聯(lián)時(shí)間結(jié)束后，交聯(lián)儀紫外燈自動(dòng)停止運(yùn)行。